Diagn贸stico micol贸gico por t茅cnicas no convencionales en el siglo XXI

Introducci贸n: En la actualidad las infecciones f煤ngicas representan un problema para la salud humana. Las infecciones causadas por especies pat贸genas de hongos registran un incremento constante y se ubican entre el cuarto y d茅cimo lugar como causa de muerte, particularmente en las unidades de cuidado intensivo. Un diagn贸stico adecuado y precoz impacta directamente en la morbilidad y mortalidad asociadas a estas.

Objetivo: Describir las principales t茅cnicas de diagn贸stico no convencional de las enfermedades f煤ngicas m谩s frecuentes, en especial las relacionadas con el diagn贸stico serol贸gico y molecular. Mtodos: Se realiz贸 una revisi贸n de la literatura cient铆fica sobre el tema, publicada entre 2000 y 2019. Se revisaron un total de 63 trabajos. Como motores de b煤squeda se emplearon Google y Google Scholar. Se revisaron las bases de datos Medline, PubMed, Science Direct, BUCea y SciELO.

An谩lisis y s铆ntesis de la informaci贸n: Las t茅cnicas serol贸gicas se emplean en el diagn贸stico de las micosis invasivas o sist茅micas por ser f谩ciles, r谩pidas y confiables. La detecci贸n de anticuerpos tiene utilidad limitada en el diagn贸stico de las micosis invasivas debido a que la respuesta puede estar retrasada, reducida o no existir en pacientes inmunocomprometidos. La detecci贸n de componentes no antig茅nicos liberados por los hongos durante la infecci贸n y la secuenciaci贸n de 谩cidos nucleicos f煤ngicos son otras opciones para el diagn贸stico de las micosis.

Conclusiones: El desarrollo biotecnol贸gico aporta nuevas herramientas que incrementan las oportunidades de identificaci贸n de las micosis. En la actualidad se disponen de m茅todos basados tanto en la detecci贸n de marcadores inmunol贸gicos como de elementos moleculares espec铆ficos. La eficacia de las herramientas no convencionales para el diagn贸stico depende de la correcta combinaci贸n de estas.

Elizabeth Fuentes Feria, Mar铆a Teresa Illnait.Zaragoz铆
 
Evaluaci贸n de estuches de PCR-tiempo real para detecci贸n de virus del papiloma humano de alto riesgo

Introducci贸n: El empleo de t茅cnicas moleculares para el diagn贸stico de virus del papiloma humano de alto riesgo oncog茅nico (VPH-AR) es crucial para la detecci贸n precoz del c谩ncer cervicouterino.

Objetivo: Evaluar el desempe帽o anal铆tico de dos estuches de PCR-tiempo real, comercializados por el Centro de Inmunoensayo de Cuba, para detectar VPH-AR.

M茅todos: Se utilizaron dos paneles de ADN de muestras cervicouterinas: uno con 150 muestras, para validar el estuche SUMASIGNAL HPV 16/18, el proceso de extracci贸n de ADN y su utilidad como prueba cuantitativa, y otro con 163 muestras para evaluar el estuche HPV 13+2. Se determin贸 la utilidad cl铆nica del estuche HPV 13+2 en 55 muestras cervicovaginales autocolectadas. Se calcularon los indicadores de desempe帽o anal铆tico de ambos estuches con respecto a pruebas de referencia.

Resultados: Los indicadores de desempe帽o para SUMASIGNAL HPV 16/18 fueron excelentes (> 95 %), concordancia 96 %, 铆ndice kappa=0,93 [0,85-1,01]. La extracci贸n de ADN mostr贸 100 % de especificidad cl铆nica y anal铆tica y 95 % de sensibilidad anal铆tica. Se obtuvo buena correlaci贸n con la prueba de referencia cuantitativa (r = + 0,688). El estuche HPV 13+2 tuvo especificidad y sensibilidad cl铆nicas del 100 %, la especificidad anal铆tica fue del 84 % debido a reactividad cruzada con otros VPH-AR. Su aplicaci贸n cl铆nica revel贸 alta frecuencia de infecci贸n (41,8 %): 23,6 % con VPH-AR, particularmente en mujeres j贸venes (50 %). La muestra autocolectada result贸 煤til (100 %).

Conclusi贸n: Los ensayos evaluados mostraron altos est谩ndares de calidad, lo que permitir铆a su uso con una cobertura nacional en una plataforma tecnol贸gica disponible para todo el pa铆s.

Yudira Soto Brito, Yailen S谩nchez Dom铆nguez, Darien Ortega Le贸n, Vivian Kouri Cardell谩, Ariel Palenzuela D铆az, Licel de los 脕ngeles Rodr铆guez Lay, Yaim茅 Josefina Gonz谩lez Gonz谩lez, Celeste Ram铆rez Cardentey, Yoanna Ba帽os Morales
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Rams茅s Alfaro Mora
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Liena de Regla Ponce Rey, Maday Alonso del Rivero Antigua, Sonia Resik Aguirre
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Identificaci贸n de especies de Leishmania mediante PCR en tiempo real acoplada a curvas de fusi贸n de alta resoluci贸n

Introducci贸n: La leishmaniasis es una enfermedad causada por par谩sitos del g茅nero Leishmania. En Colombia se han informado 10 especies pat贸genas. El diagn贸stico parasitol贸gico tradicional basado en la observaci贸n de los par谩sitos no permite identificar la especie, por lo cual se deben emplear m茅todos moleculares, entre ellos la reacci贸n en cadena de la polimerasa o PCR convencional, pero esta presenta algunas limitaciones y requiere extensos periodos de tiempo para la obtenci贸n de resultados, que en ocasiones no son concluyentes.

Objetivo: Evaluar un m茅todo basado en PCR en tiempo real acoplado a curva de temperatura de desnaturalizaci贸n media de alta resoluci贸n (PCR-HRM) que permita el diagn贸stico y la identificaci贸n simult谩nea de par谩sitos del g茅nero Leishmania en muestras cl铆nicas de humanos y en cultivos in vitro de manera sensible y espec铆fica.

M茅todos: Se estandariz贸 una PCR-HRM, mediante la cual se evaluaron 237 muestras cl铆nicas, 98 clasificadas como positivas y 139 como negativas, parasitol贸gicamente por directo y/o cultivo. Las tipificaciones fueron comparadas con los resultados en paralelo obtenidos de una variante de la RCP, realizando cortes al amplicon que gener贸 un fragmento de restricci贸n de longitud polim贸rfica o PCR-RFLP que hab铆a sido previamente estandarizada.

Resultados: Se logr贸 implementar una PCR-HRM para el diagn贸stico e identificaci贸n de especies de Leishmania, logrando un 100 % de concordancia con las tipificaciones obtenidas por PCR-RFLP. Incluso, se logr贸 detectar e identificar el par谩sito en muestras diagnosticadas como negativas por los m茅todos convencionales. Se encontr贸 que con un porcentaje de confiabilidad superior al 95 %, se lograron tipificar 91 muestras de 98; de estas el 81,63 % de los casos fueron L. panamensis, el 11,22% L. braziliensis e indeterminadas el 7,14 % de los casos.

Conclusiones: La PCR-HRM es un buen m茅todo que permite la identificaci贸n de las especies m谩s prevalentes en Colombia, comparando temperaturas medias de desnaturalizaci贸n espec铆ficas seg煤n la especie de Leishmania involucrada.

Rafael Guillermo Villarreal Julio, Giovanny Herrera, Carlos Enrique Muskus L贸pez
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Frecuencia de infecci贸n por cestodos en el Laboratorio Nacional de Referencia de Parasitismo Intestinal-IPK, Cuba, 2010-2018

Introduci贸n: Los cestodos son helmintos par谩sitos del humano y de animales, con complejos ciclos de vida. En las infecciones por los cestodos no existen programas de desparasitaci贸n masiva implementados para disminuir la carga parasitaria de estos a nivel mundial, dada la baja prevalencia que se informa en estudios epidemiol贸gicos. Existen pocos trabajos sobre la epidemiolog铆a y la detecci贸n de estas infecciones en la literatura internacional.

Objetivo: Describir la frecuencia de infecci贸n de cestodos y sus caracter铆sticas epidemiol贸gicas.

M茅todos: Estudio descriptivo y retrospectivo, realizado entre el 3 de enero de 2010 y 28 de diciembre de 2018. Se analizaron todas las muestras de heces, par谩sitos adultos y metacestodos enviadas de la red de Salud al Laboratorio Nacional de Referencia de Parasitismo Intestinal-IPK. El universo de estudio estuvo constituido por 9833 muestras, que fueron enviadas mayoritariamente de la provincia La Habana.

Resultados: La infecci贸n por Inermicapsifer madagascariensis predomin贸 en ni帽os menores de 5 a帽os (69,6 %; IC 95 %: 47,1-86,8). La infecci贸n intestinal por Taenia spp. se diagnostic贸 prinipalmente en pacientes entre 15 y 65 a帽os de edad (88,2 %; IC95 %: 63,6-98,5). De los 47 casos positivos a la infecci贸n por cestodos, 24 pertenecieron al sexo femenino (51,1 %; IC95 %: 35,7-66,4) y 23 al sexo masculino (48,9 %; IC95 %: 33,6-64,3). No hubo diferencias significativas entre la infecci贸n por Inermicapsifer madagascariensis y Taenia spp. y el sexo de los pacientes (p藘 0,05).

Conclusiones: Aunque la frecuencia de infecci贸n de las cestodiosis detectadas es baja, estos resultados pudieran ser 煤tiles para un control integrado de las principales cestodioisis en los diferentes grupos etarios.

Luis Enrique Jerez Puebla, Fidel 脕ngel N煤帽ez Fern谩dez, Ira铆s Virginia Atencio Mill谩n, Ra煤l Cordov铆 Prado, L谩zara Rojas Rivero, Yanet Fresco Sampedro, Laura Rodr铆guez Moreno, Marisol Mart铆nez Cruz, Anyelo B谩ez Garc铆a
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Carlos Manuel Fern谩ndez Andreu, Gerardo Mart铆nez Mach铆n, Mayda Rosa Perurena Lancha, Mar铆a Teresa Illnait Zaragoz铆, Rosario Velar Mart铆nez, Javier Luis San Juan Gal谩n
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Rafael Guillermo Villarreal Julio, Enderson Murillo Ramos, Rene Ram铆rez Garc铆a, Ronald Guillermo Pel谩ez S谩nchez, Freddy Ruiz L贸pez, Luz Adriana Agudelo, Iv谩n Dar铆o V茅lez Bernal, Carlos Enrique Muskus L贸pez, Juan 脕lvaro L贸pez Quintero, Piedad Matilde Agudelo Fl贸rez
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Una d茅cada de progresos en la vigilancia de laboratorio de los virus influenza en Cuba

Introducci贸n: el Sistema Global de Vigilancia y Respuesta para la Influenza creado por la Organizaci贸n Mundial de la Salud trabaja en la vigilancia virol贸gica de influenza desde 1952. El Centro Nacional de Influenza de Cuba pertenece a esta red desde 1975. Las infecciones por los virus influenza ocasionan anualmente epidemias con una mortalidad alta, fundamentalmente entre adultos 鈮 65 a帽os. Al mismo tiempo son causa de pandemia, lo que exige un esfuerzo continuo de las autoridades de salud para la confecci贸n de planes que permitan la preparaci贸n y el enfrentamiento de estos eventos. En este contexto, durante la 煤ltima d茅cada el Centro Nacional de Influenza en Cuba ha trabajado en el fortalecimiento de las capacidades diagn贸sticas e investigativas para dar respuesta a las emergencias de salud ocasionadas por los virus influenza.
Objetivo: evaluar los avances alcanzados en la vigilancia de laboratorio de los virus influenza a partir del 2005 hasta la actualidad.
M茅todos: se realiz贸 un an谩lisis de los resultados alcanzados por el Centro Nacional de Influenza al introducir nuevos ensayos de diagn贸stico molecular, llevar a cabo la caracterizaci贸n gen茅tica de virus influenza circulantes, desarrollar investigaciones sobre inmunopatogenia y el estudio del patr贸n estacional de influenza.
Resultados: en el per铆odo 2006-2016 se increment贸 el n煤mero y calidad de las muestras cl铆nicas para el diagn贸stico y vigilancia de los virus influenza. Se ampliaron las capacidades diagn贸sticas mediante la introducci贸n de ensayos de reacci贸n en cadena de la polimerasa en tiempo real. Los an谩lisis filogen茅ticos permitieron la detecci贸n de variantes gen茅ticas. El patr贸n estacional de los virus influenza fue similar al de pa铆ses del hemisferio sur.
Conclusiones: la disponibilidad de m茅todos sensibles y r谩pidos para el diagn贸stico y vigilancia de los virus influenza contribuye a la identificaci贸n oportuna de virus emergentes y re-emergentes para la implementaci贸n de medidas de salud p煤blica que minimizan su impacto nacional y global.

Belsy Osoria Acosta Herrera, Alexander Pi帽贸n Ramos, Odalys Vald茅s Ram铆rez, Amely Arencibia Garcia, Clara Sav贸n Vald茅s, Suset Oropeza Fernandez, Mayra Mun茅 Jim茅nez, Grehete Gonzalez Mu帽oz, Angel Goyenechea Hernandez, Guelsys Gonzalez Baez, B谩rbara Hern谩ndez Espinosa, Luis Morier D铆az, Susana Borroto, Maria Josefa LLanes, Antonio Marrero
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Evaluaci贸n de las habilidades pr谩cticas para realizar el diagn贸stico microsc贸pico de la malaria en tres provincias de la Rep煤blica de Cuba

Introducci贸n: la realizaci贸n de la microscopia 贸ptica, a pesar de ser la t茅cnica de referencia para el diagn贸stico de la malaria, contin煤a presentando varias limitaciones, algunas de ellas asociadas a las condiciones propias de los laboratorios y, por otra parte, a la formaci贸n y la experiencia del personal que realiza la lectura de la gota gruesa y el extendido.
Objetivo: evaluar las habilidades pr谩cticas para el diagn贸stico microsc贸pico de la malaria en tres provincias de la Rep煤blica de Cuba.
M茅todos: el estudio se realiz贸 en el per铆odo comprendido entre octubre a noviembre de 2016. Participaron un total de 45 personas de las provincias Pinar del R铆o, Villa Clara y Santiago de Cuba. El estudio incluy贸 tres fases: 1) evaluaci贸n de las habilidades pr谩cticas para realizar el diagn贸stico microsc贸pico de la malaria y detectar insuficiencias pr谩cticas en relaci贸n con este; 2) intervenci贸n educativa con el prop贸sito de atenuar las deficiencias pr谩cticas encontradas; y 3) evaluaci贸n de la eficacia de la intervenci贸n educativa realizada. Todos los an谩lisis fueron desarrollados empleando los paquetes de programas para an谩lisis estad铆sticos EpiInfo versi贸n 6.04 para Windows y Epidat 3.1.
Resultados: se mostraron insuficiencias pr谩cticas en la realizaci贸n del diagn贸stico microsc贸pico de la malaria por parte del personal t茅cnico que realiza esta actividad. Estas estuvieron relacionadas fundamentalmente con aspectos microsc贸picos y morfol贸gicos, lo cual conspira contra la calidad del diagn贸stico microsc贸pico. La realizaci贸n de una intervenci贸n educativa fue efectiva, pues permiti贸 mejorar significativamente las habilidades pr谩cticas relacionadas con el diagn贸stico microsc贸pico de la enfermedad en el grupo de personas que participaron en el estudio.
Conclusiones: estos resultados servir谩n de base para la aplicaci贸n de una posible intervenci贸n educativa dirigida a mejorar la calidad del diagn贸stico de la malaria en la red de laboratorios de Cuba.

L谩zara Rojas Rivera, Dora E. Ginorio Gavito, Fidel A. Nu帽ez Fern谩ndez, Mar铆a Isabel Valdespino, Nidelvys Hern谩ndez Castellanos, Mar铆a de Lourdes S谩nchez Alvarez, Vicente Montoto Mayor
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Leishmania y leishmaniasis. Veinte a帽os de estudio en el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kour铆": aportes y perspectivas

Introducci贸n: la leishmaniasis es una enfermedad parasitaria causada por varias especies del g茅nero Leishmania, protozoo par谩sito que no circula en Cuba de forma aut贸ctona. Sin embargo, se presentan casos importados. Existen tres formas cl铆nicas principales y diversos m茅todos para realizar el diagn贸stico, que incluyen los parasitol贸gicos, serol贸gicos y m谩s recientemente, los moleculares. El tratamiento de elecci贸n son los antimoniales pentavalentes, los cuales presentan inconvenientes que han estimulado la b煤squeda de nuevas alternativas terap茅uticas.
Objetivos: resumir los resultados de trabajo obtenidos en el estudio de Leishmania durante 20 a帽os y explicar las razones que motivaron la capacitaci贸n, entrenamiento e investigaci贸n de esta entidad en el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kour铆".
M茅todos: se realiz贸 un estudio bibliom茅trico y se analizaron todos los resultados de trabajo del grupo de Leishmania del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kour铆" durante 20 a帽os. Se consultaron todas las publicaciones realizadas en el grupo y se determinaron los resultados fundamentales en las principales l铆neas de investigaci贸n.
Resultados: se describen los aportes m谩s importantes en 谩reas de investigaci贸n como la inmunizaci贸n con ADN, el diagn贸stico molecular y la b煤squeda de nuevas alternativas terap茅uticas, y se remite al lector a consultar las publicaciones que contienen los detalles de cada estudio. Se mencionan las colaboraciones principales con centros nacionales y extranjeros. Se comentan las perspectivas futuras del trabajo del grupo de investigaci贸n.
Conclusiones: el grupo ha acometido l铆neas de investigaci贸n de inter茅s y es responsable del mayor aporte del pa铆s en el campo de investigaci贸n de este par谩sito, en correspondencia con su misi贸n. La continuidad de la investigaci贸n, contribuir a la soluci贸n de algunos de los problemas a煤n no resueltos de esta parasitosis y la aplicaci贸n de los resultados obtenidos, ser谩 un reto para los pr贸ximos a帽os.

Ana Margarita Montalvo 脕lvarez, Lianet Monzote Fidalgo
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Evaluaci贸n de la viabilidad de Legionella pneumophila en muestras de agua

Introducci贸n: Legionella pneumophila se sit煤a entre los principales agentes causales de neumon铆a adquirida en la comunidad y de origen nosocomial. La inhalaci贸n de aerosoles potencialmente contaminados con la bacteria, producto de la colonizaci贸n de redes y otros sistemas que utilizan agua, representa un peligro para la salud de los individuos expuestos.
Objetivo:
evaluar la viabilidad de L. pneumophila en muestras de agua almacenadas en diferentes intervalos de tiempo para el diagn贸stico por cultivo microbiol贸gico de Legionella spp.
M茅todos: Se contaminaron artificialmente muestras de agua con dos cepas de L. pneumophila de serogrupos diferentes y la conformaci贸n de una mezcla de ellas, para un total de 15 muestras. Los frascos contaminados fueron procesados a las 24 h, 72 h, 7 d铆as, 14 d铆as y 21 d铆as. Se realiz贸 cultivo microbiol贸gico seg煤n ISO 11731: 2004 y PNO 03-013: 2015.
Resultados: Se demostr贸 viabilidad de la bacteria en muestras almacenadas hasta 21 d铆as. El m茅todo de concentraci贸n por filtraci贸n result贸 tener los mayores recobrados del microorganismo.
Conclusiones: El tiempo de almacenamiento de las muestras afecta la viabilidad de L. pneumophila. Sienta las bases para estudios posteriores de robustez del diagn贸stico de L. pneumophila como parte del servicio que presta el Centro de Investigaciones Cient铆ficas de la Defensa Civil en los programas de prevenci贸n y control Legionella spp. en instalaciones de inter茅s tur铆stico e industrial.

Majela Garc铆a Montero, Nibaldo Luis Gonz谩lez Sosa, Humberto Franco Villavicencio, Gloria Greite Jim茅nez Alfonso
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Comisi贸n de diagn贸stico de casos sospechosos de tuberculosis con baciloscopia negativa: aceptabilidad del servicio por los m茅dicos presentadores

Introducci贸n: en etapa de eliminaci贸n de la tuberculosis, resulta de gran inter茅s la identificaci贸n temprana de estos enfermos en cualquiera de sus formas, incluyendo aquellos con manifestaciones cl铆nicas-radiol贸gicas y microscop铆a negativa.
Objetivos: conocer la frecuencia con que los m茅dicos de diferentes servicios de salud presentan los expedientes cl铆nicos de enfermos sospechosos de tuberculosis en la Comisi贸n de Diagn贸stico de enfermos de Tuberculosis con Baciloscopias Negativas (CODIBAARNE) del Hospital Neumol贸gico Ben茅fico Jur铆dico de La Habana, la procedencia de dichos facultativos y sus opiniones sobre este servicio cient铆fico-t茅cnico.
M茅todos: estudio descriptivo exploratorio. Para precisar la procedencia de los m茅dicos presentadores, se aplic贸 un 煤nico formulario de encuesta.
Resultados: en el 2004-05 se encuestaron 181 m茅dicos y en el 2011, 40. De los primeros 181 encuestados, 118 (65,2 %) proced铆an de 44 policl铆nicos de la atenci贸n primaria de salud y 63 (34,8 %) de 17 hospitales de atenci贸n secundaria. Del primer grupo, 142 (78,5 %) consideraron bueno y 煤til el servicio cient铆fico-t茅cnico y 34 (19 %) expresaron que era instructivo y aprend铆an con el servicio brindado. Del segundo grupo, 33 (82,5 %) son M茅dicos Generales Integrales, y expresaron opiniones muy similares a las del primer grupo entrevistado.
Conclusi贸n : CODIBAARNE brinda extensa cobertura de servicios cient铆fico-t茅cnicos a m茅dicos de atenci贸n primaria y secundaria, que suscitan opiniones muy favorables de la gran mayor铆a de sus usuarios, consider谩ndola como una herramienta complementaria para el diagn贸stico de la tuberculosis con baciloscopia negativa.

Mariana Peralta P茅rez, Lellanis Arroyo Rojas, Delfina Machado Molina, Sara M. Marfil Iniesta, Yaxsier de Armas Rodr铆guez, Aleida Valladares Baena, Gilda Ferrer Rivera, Luisa Armas P茅rez
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Nuevas herramientas para el diagn贸stico de la tuberculosis

Introducci贸n: en las 煤ltimas d茅cadas se han desarrollado nuevas herramientas para disminuir el tiempo de diagn贸stico de las infecciones por Mycobacterium tuberculosis.
Objetivo: introducir nuevas herramientas para la identificaci贸n de M. tuberculosis y comparar los resultados con el cultivo en L枚wenstein Jensen.
M茅todos: se estudiaron 1 368 muestras recibidas en el Laboratorio Nacional de Referencia de Tuberculosis del Instituto de Medicina Tropical 鈥淧edro Kour铆鈥, de agosto 2010 - agosto 2014. Las muestras despu茅s de procesadas fueron inoculadas en paralelo en L枚wenstein Jensen y en BacT ALERT. Los resultados se ana颅lizaron y compararon con relaci贸n al total de aislamientos, tiempo de detecci贸n de crecimiento y tasa de contaminaci贸n, se calcularon adem谩s los indicadores de desempe帽o del BacT ALERT.
Resultados: por Bact/ ALERT se identific贸 Mycobacterium tuberculosis en 126 (98,5 %) muestras y 116 (88,5 %) por el L枚wenstein Jensen. El tiempo de detecci贸n de crecimiento de Mycobacterium tuberculosis por el BacT/ ALERT fue de 16,6 d铆as, dos veces menor que el obtenido por el L枚wenstein Jensen (35,5 d铆as). La tasa de contaminaci贸n por el Bact/ ALERT y L枚wenstein Jensen fue de 11 % y 7,8 %, respectivamente. La sensibilidad, especificidad e 铆ndice de Youden fue de 99,1 %, 99,0 % y 0,98, respectivamente; y el 铆ndice de validez del 99 %.
Conclusiones: el sistema Bact/ ALERT result贸 un m茅todo 煤til porque acort贸 significativamente el tiempo de diagn贸stico de la tuberculosis permitiendo comenzar el tratamiento de forma oportuna, sobre todo en pacientes con baciloscopia negativa. El uso combinado del L枚wenstein Jensen y medio l铆quido asegur贸 la recuperaci贸n del total de cepas de M. tuberculosis.

Mar铆a Rosarys Mart铆nez Romero, Misleidis Sardi帽a Arag贸n, Grechen Garc铆a Le贸n, Lilian Mar铆a Mederos Cuervo, Ra煤l D铆az Rodr铆guez
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Normalizaci贸n de una nueva variante de reacci贸n en cadena de la polimerasa-hsp 20 (PCR-hsp20S) 煤til para la detecci贸n de Leishmania

Introducci贸n: La leishmaniasis es una parasitosis producida por m谩s de 20 especies de Leishmania. La enfermedad tiene una amplia distribuci贸n mundial en zonas tropicales y subtropicales y se presenta en tres formas cl铆nicas fundamentales: la leishmaniasis cut谩nea, mucocut谩nea y visceral. Existen varios procedimientos de laboratorio para realizar el diagn贸stico, pero contin煤a la investigaci贸n acerca de la detecci贸n molecular del par谩sito ante la falta de consenso sobre los protocolos en uso.
Objetivos: desarrollar y normalizar una nueva reacci贸n en cadena de la polimerasa (PCR), que amplifique un fragmento m谩s corto del gen hsp20.
M茅todos: Se utilizaron cepas de referencia del par谩sito para realizar la normalizaci贸n de un nuevo ensayo de PCR que amplifica un fragmento corto del gen que codifica para la peque帽a prote铆na de 20 Kda. Se evaluaron las cantidades y concentraciones 贸ptimas del ensayo, la sensibilidad anal铆tica para L. braziliensis, la especificidad anal铆tica as铆 como la repetibilidad, y se evalu贸 su desempe帽o con cepas de referencia.
Resultados: Se determinaron las condiciones 贸ptimas de amplificaci贸n de la nueva PCR-hsp20S, y se demostr贸 que amplifica las principales especies de importancia m茅dica. La sensibilidad anal铆tica result贸 en 100 fg para L. braziliensis.
Conclusiones: Las condiciones establecidas garantizan un buen desempe帽o de esta propuesta de PCR, y la sensibilidad anal铆tica y especificidad obtenidas permiten evaluar su desempe帽o para el diagn贸stico utilizando muestras cl铆nicas. Las condiciones de este protocolo, sensibilidad y especificdad y otros par谩metros establecidos permiten recomendar su evaluaci贸n para su posible uso diagn贸stico.

Ana Margarita Montalvo, Jorge Fraga, Lisandra 脕lvarez, Annia Alba, Cecia Torres
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Demora del diagn贸stico de tuberculosis pulmonar bacilosc贸picamente negativa en un municipio y hospitales de La HabanaIntroducci贸n: la tuberculosis se mantiene como un problema de salud mundial importante, asociado a determinantes socioecon贸micas.
Objetivo: estimar la demora en el diagn贸stico de la Tuberculosis pulmonar con baciloscopia negativa en un municipio y hospitales de La Habana.
M茅todos: estudio de auditor铆a m茅dica en pacientes diagnosticados en nueve hospitales Cl铆nico Quir煤rgicos de La Habana (julio 2004 a junio 2005) y en el municipio Boyeros 2003-2011. Las variables estudiadas fueron: edad, demora del paciente (en d铆as) entre las fechas de inicio de los primeros s铆ntomas e ingreso hospitalario o solicitud de la primera consulta; demora de los servicios de salud (en d铆as) entre el ingreso hospitalario o la solicitud de la primera consulta y la confirmaci贸n del diagn贸stico as铆 como la demora total.
Resultados: en los hospitales la demora mediana total fue de 194 d铆as para la Tuberculosis pulmonar con baciloscopia negativa con cultivo positivo, mientras que para la TBp BAAR 鈥 Cl铆nica-Radiol贸gica fue de 71 d铆as. En Boyeros la demora atribuible al paciente en la TBp BAAR- cultivo positivo tuvo una mediana de 102 d铆as, y atribuible a los servicios 54 d铆as. Para la Tuberculosis pulmonar con baciloscopia negativa Cl铆nica-Radiol贸gica estas fueron de 18 y 36 d铆as respectivamente. Hubo mayor demora en el diagn贸stico de los pacientes mayores de 60 a帽os. Conclusi贸n: un diagn贸stico oportuno minimiza el tiempo para el inicio del tratamiento y reducir铆a adicionalmente la transmisi贸n de la tuberculosis en el contexto evaluado.
Amparo Olga D铆az Castrillo, Digna Ramos Molina, Reina Susana Zarut Cruz, Luisa Armas P茅rez, Edilberto Gonz谩lez Ochoa
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驴Leishmaniasis o psoriasis? Diagn贸stico diferencial

Introducci贸n: la leishmaniasis es una enfermedad parasitaria causada por varias especies del g茅nero Leishmania, que se presenta en formas cl铆nicas muy diversas. Entre las formas cut谩neas, se ha notificado ocasionalmente la leishmaniasis psoriasiforme. Es imprescindible tener la certeza diagn贸stica de leishmaniasis dada la toxicidad y los efectos colaterales que tienen las drogas de primera l铆nea para tratarla. Se emplean varios m茅todos para llegar al diagn贸stico, como son desde la identificaci贸n del par谩sito en el tejido hasta la detecci贸n de su ADN.
M茅todos
: se realiz贸 la recopilaci贸n y an谩lisis de la informaci贸n de un caso cl铆nico con supuesta leishmaniasis, y se aplicaron distintos m茅todos de laboratorio para definir el diagn贸stico, tales como examen parasitol贸gico directo, examen histopatol贸gico, cultivo y reacci贸n en cadena de la polimerasa (PCR-18S y PCR-hsp70).
Resultados y discusi贸n: los ex谩menes realizados para confirmar el diagn贸stico de leishmaniasis fueron negativos. Al estudio histol贸gico, la lesi贸n dermatol贸gica se concluye como psoriasis.
Conclusiones: aunque la literatura cient铆fica notifica casos de leishmaniasis de tipo psoriasiforme estos son escasos. El estudio integral del caso por diferentes m茅todos descart贸 la supuesta leishmaniasis en este paciente, lo cual permiti贸 la aplicaci贸n del tratamiento adecuado y evit贸 el uso indebido de antimoniales para su tratamiento.

Ana Margarita Montalvo Alvarez, Orestes Blanco Gonz谩lez, Virginia Cap贸 de Paz, Jorge Fraga Nodarse, Lianet Monzote Fidalgo
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M茅todo de reacci贸n en cadena de la polimerasa para determinar la replicaci贸n del virus de la hepatitis B

Objetivo: evaluar el desempe帽o cl铆nico de un m茅todo de reacci贸n en cadena de la polimerasa con modificaciones para la detecci贸n de la replicaci贸n del virus de la hepatitis B en pacientes infectados.
M茅todos: se estudiaron 266 muestras de suero de pacientes provenientes de los servicios de Gastroenterolog铆a, Trasplante, Hemodi谩lisis y Hematolog铆a del Hospital Cl铆nicoquir煤rgico "Hermanos Ameijeiras", con el ant铆geno de superficie (HBsAg) positivo y altos valores de enzimas hep谩ticas (aspartatoaminotransferasa, aspartatoaminotransglutaminasa y ganmaglutamiltrasferasa), as铆 como 5 muestras de individuos cl铆nicamente sanos. El ADN se extrajo mediante el m茅todo del fenol-cloroformo. Se amplific贸 un fragmento de la regi贸n Pre S del virus de la hepatitis B y un fragmento del gen de la 脽-globina como control interno de la reacci贸n.
Resultados: El fragmento del gen de la 脽-globina se verific贸 en las 266 muestras estudiadas. La regi贸n Pre S del virus de la hepatitis B en cambio, fue detectada en 103 de ellas, siendo informadas como positivas para la replicaci贸n viral. En la muestra se obtuvo una prevalencia 98,15 % para la replicaci贸n del virus de la hepatitis B. La especificidad cl铆nica del ensayo fue del 100 %, la sensibilidad cl铆nica del 38 %, el valor predictivo positivo del 100 % y el valor predictivo negativo del 64 %. El an谩lisis de concordancia no mostr贸 acuerdo (魏= 0,022 para una p= 0,07) entre las enzimas hep谩ticas y la reacci贸n en cadena de la polimerasa. Los ensayos de repetitividad y de reproducibilidad mostraron que los resultados son reproducibles. El mayor porcentaje de positividad se encontr贸 en los pacientes remitidos por el Servicio de Hematolog铆a (66,7 %).
Conclusiones: el m茅todo de reacci贸n en cadena de la polimerasa evaluado constituye una herramienta certera para el monitoreo de la replicaci贸n del virus de la hepatitis B. Contar con su implementaci贸n y aplicaci贸n en la instituci贸n que se efetu贸 el estudio reviste gran importancia para el sistema de salud del pa铆s.

Maria Teresa Mart铆nez Echevarr铆a, Suchiquil Rangel Velazquez, Gissel Garc铆a Men茅ndez, Amarylis Mart铆nez Piedra, Pedro E. Velbes Marquetti, Ra煤l Pablo Ferreira Capote
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Evaluaci贸n de la calidad del diagn贸stico de la malaria por microscop铆a 贸ptica en laboratorios provinciales de la Rep煤blica de Angola

Introducci贸n: la malaria contin煤a siendo uno de los m谩s importantes problemas de la salud p煤blica a nivel mundial y afecta severamente al continente africano.
Objetivo: evaluar el nivel de conocimientos te贸ricos y pr谩cticos en el diagn贸stico de la malaria de un grupo de t茅cnicos dedicados a esta actividad.
M茅todos: entre los a帽os 2010 y 2012, se realiz贸 un estudio cuasi experimental de evaluaci贸n en la red de salud, en 14 laboratorios provinciales de las 18 provincias de la Rep煤blica Angola, donde se entrenaron 243 t茅cnicos que realizan habitualmente el diagn贸stico de la malaria. Se hicieron entrenamientos de 10 d铆as (70 horas) cumplimentando un programa que incluy贸 clases pr谩cticas y te贸ricas, y sus respectivas evaluaciones inicial y final.
Resultados: despu茅s de los entrenamientos en cada una de las 14 provincias evaluadas la frecuencia de los t茅cnicos desaprobados en la evaluaciones te贸ricas y pr谩cticas disminuy贸 significativamente, (p<0,01).
Conclusiones: este es el primer trabajo realizado en Angola donde se demuestra una mejor铆a cualitativa y cuantitativa tanto en los conocimientos te贸ricos y habilidades pr谩cticas de los t茅cnicos despu茅s de un entrenamiento y readiestramiento, y constituye el primer paso de un esfuerzo encaminado para mejorar el diagn贸stico de la malaria en el pa铆s.

Garc铆a Nazar茅 Pembele, Filomena da Silva, Carolina Ferreira Miguel, Pedro Rafael Dimbu, Filomeno Fortes, L谩zara Rojas Rivero
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Ana Margarita Obregon Fuentes
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Diagn贸stico molecular de histoplasmosis diseminada en pacientes cubanos con sidaIntroducci贸n: Histoplasma capsulatum es el agente causal de la histoplasmosis. La forma diseminada de esta micosis de no ser tratada suele ser fatal.
Objetivo:
evaluar el empleo de sangre perif茅rica para el diagn贸stico molecular de histoplasmosis diseminada y comparar sus resultados con el cultivo y la detecci贸n de anticuerpos espec铆ficos.
M茅todos:
se determin贸 la presencia de ADN de Histoplasma capsulatum a partir de 12 muestras de sangre de pacientes con sida y sospecha cl铆nica de histoplasmosis diseminada, mediante dos sistemas de reacci贸n en cadena de la polimerasa (una simple y otra anidada, que amplifican un fragmento de la regi贸n ITS y del gen Hcp100, respectivamente). Se compararon los resultados con el cultivo y la serolog铆a.
Resultados:
mediante la reacci贸n en cadena de la polimerasa simple y anidada se diagnostic贸 con histoplasmosis diseminada a los 12 pacientes. Por cultivo resultaron positivos 6 casos (50 %). Mientras que la presencia de anticuerpos anti-Histoplasma capsulatum se determin贸 en 3 casos (25 %). Los sistemas de reacci贸n en cadena de la polimerasa empleados mostraron elevada sensibilidad, especificidad anal铆tica y diagn贸stica en la detecci贸n de Histoplasma capsulatum en esta forma cl铆nica.
Conclusiones:
los resultados del estudio sugieren que las t茅cnicas de reacci贸n en cadena de la polimerasa aumentan la fiabilidad del diagn贸stico de la histoplasmosis cuando se utiliza en combinaci贸n con los m茅todos establecidos. Los sistemas de reacci贸n en cadena de la polimerasa aplicados al diagn贸stico de histoplasmosis diseminada en pacientes con sida probaron ser sistemas r谩pidos, espec铆ficos y sensibles.
Ernesto Monroy Vaca, Gerardo Mart铆nez Mach铆n, Carlos Fern谩ndez Andreu, Mar铆a Teresa Illnait Zaragoz铆, Aiyal茅n Garc铆a Rodr铆guez, Mayda Perurena Lancha, Ra煤l D铆az Rodr铆guez
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