Evaluación preliminar de la actividad de Ageratina havanensis contra dengue virus 2

Introducción: El dengue es la enfermedad viral transmitida por mosquitos de más rápida propagación en el mundo. A pesar de la alta incidencia de la enfermedad no existe tratamiento antiviral efectivo ni vacuna aprobada para su uso contra esta infección. La planta Ageratina havanensis ha sido ampliamente utilizada por nuestra cultura popular y en otros países debido a sus diversas propiedades biológicas.

Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de cuatro extractos provenientes de Ageratina havanensis y dos flavonoides aislados de dicha planta frente al virus dengue 2.

Métodos: La pesquisa primaria de actividad antiviral de cada extracto y flavonoide se realizó mediante el ensayo de detección de la productividad vírica, y se evaluó la acción virucida de los extractos etanólico de tallo y butanólico de hoja.

Resultados: Todos los extractos inhibieron la replicación viral al evidenciarse disminución del número de placas de lisis, sin embargo, no se evidenció disminución del título infectivo viral en el ensayo virucida. El tratamiento con la sakuranetina mostró valores de inhibición de la productividad viral entre 61-91 %, y para la 7-metoxiaromadendrina se registraron valores de reducción viral entre 64-86 %.

Conclusiones: Los extractos y flavonoides aislados de Ageratina havanensis mostraron acción antiviral. Los extractos etanólico de tallo y butanólico de hojas no poseen acción virucida sobre la cepa viral empleada. El presente trabajo constituye el primer informe respecto a la evaluación de extractos y compuestos aislados de A. havanensis frente al virus dengue.

Gloria del Carmen del Barrio Alonso, Yenisey Jardines Figueredo, Iraida Spengler Salabarría, Trina Haydee García Pérez, Annelle Roque Quintero, Mayling Álvarez Vera
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Evaluación preliminar de la actividad antiviral de Ageratina havanensis frente al virus dengue-2 utilizando ensayos inmunoenzimáticos

Introducción: Se presenta la evaluación preliminar de la actividad antiviral de extractos de Ageratina havanensis (etanólico de tallo, AH-T-EtOH; butanólico de hoja, AH-H-ButOH y acetato de etilo de hoja, AH-H-AcEtO) utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos, un ELISA celular (ELISAc) y la técnica de inmunoperoxidasa. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de los extractos de Ageratina havanensis utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos.

Métodos: Se normalizó y empleó un ELISAc y la técnica de inmunoperoxidasa en evaluar de forma preliminar la actividad antiviral de tres extractos de Ageratina havanensis a diferentes concentraciones y tiempos de adición mediante la detección de la expresión de la proteína E del virus dengue.

Resultados: El ELISAc logró como parámetros óptimos: línea celular Vero, antígeno viral en cultivo de células, tiempo de expresión de la proteína E de 96 h, compuesto fijador metanol-acetona y bloqueador leche descremada al 1 %. La menor expresión de la proteína E (mayor inhibición sobre la replicación viral), fue al adicionar el extracto AH-T-EtOH a su mayor concentración y 1 h antes de inocular el virus dengue-2 cepa A15 (VDEN-2 A15). El extracto AH-H-ButOH a concentraciones de 125 µg/mL y 250 µg/mL presentó una ligera limitación de expresión de E 1 h después de la inoculación viral. El extracto AH-H-AcEtO a las concentraciones empleadas, no mostró difererencia añadido antes y después de la inoculación. El ensayo de inmunoperoxidasa exhibió resultados análogos para los extractos.

Conclusiones: La mayor inhibición de la replicación viral fue obtenida con el extracto AH-H-ButOH, a su mayor concentración y ambos tiempos de adición. Los ensayos inmunoenzimáticos aplicados son herramientas útiles para evaluar extractos de Ageratina havanensis con posible actividad antiviral.

Maritza Pupo Antúnez, Dailyn Medero Díaz, Susana Vázquez Ramudo, Luis Francisco Morier Díaz, Mayling Álvarez Vera, Gloria del Barrio Alonso
 
Metodología de pesquisa primaria de actividad antidengue a partir de productos naturales

Introducción: El virus dengue, transmitido por mosquitos del género Aedes ha reemergido en los últimos años produciendo la enfermedad transmitida por artrópodos con mayor prevalencia en humanos, y no existe una terapia antiviral específica ni vacunas, para su tratamiento y prevención. Ello ha motivado la búsqueda de productos y compuestos naturales con actividad antiviral, lo cual trae consigo la necesidad de establecer un sistema de evaluación de productos naturales y sintéticos mediante una metodología de pesquisa rápida in vitro.

Objetivo: Proponer un sistema de pesquisa primaria de actividad antiviral contra el virus dengue basado en células.

Métodos: Se utilizaron como fuentes primarias de información trabajos publicados en revistas nacionales e internacionales registradas en las bases de datos SciELO o PubMed. Los ejemplos seleccionados en las figuras y tabla proceden de las publicaciones conjuntas del Grupo de Virología de la Facultad de Biología de la Universidad de La Habana y del Laboratorio de Arbovirus del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí.

Información, análisis y síntesis: Se presentan las principales metodologías basadas en células, y se enfatiza en aquellas asumidas por nuestro grupo (evaluación de la citotoxicidad y el ensayo primario de actividad antiviral). Se muestra el algoritmo de evaluación de un producto. La metodología descrita ha permitido poner en marcha un programa de búsqueda de fármacos antidengue, teniendo en cuenta los criterios de la evaluación de la eficacia antiviral y la toxicidad, para realizar un estudio posterior de mecanismo de acción de los diferentes compuestos o productos evaluados.

Gloria Del Carmen Del Barrio Alonso, Mayling Alvarez Vera
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Evaluación de la actividad antiviral del alga parda Sargassum fluitans frente a Echovirus 9

I

Introducción: Echovirus 9 es un enterovirus humano de alta prevalencia que ocasiona graves enfermedades sistémicas como la meningitis aséptica y en menor medida mortalidad infantil. No existe tratamiento antiviral o vacunación para este virus, como ocurre con la mayoría de los enterovirus. Las algas del género Sargassum constituyen una fuente promisoria de compuestos con actividad antiviral, lo cual motiva la búsqueda de nuevos fármacos contra estos virus.
Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto hidroalcohólico del alga parda Sargassum fluitans frente a Echovirus 9.
Métodos: se realizó la determinación cualitativa de los tipos de metabolitos secundarios (tamizaje fitoquímico) presentes en el extracto según la técnica de Rondina y Coussio, 1969. Se evaluó la citotoxicidad del extracto en la línea celular Vero mediante el método del MTT y se calculó la CC50 mediante análisis de regresión lineal. El cálculo de la actividad antiviral (CE50) se realizó mediante la inhibición del efecto citopático en células Vero. Se determinó el índice selectivo (IS)= CC50/EC50.
Resultados: el tamizaje fitoquímico mostró la presencia de quinonas, proantocianidinas, catequinas, triterpenos polares, taninos hidrolizables, azúcares reductores, azúcares no reductores y proteínas. El extracto no fue citotóxico a las concentraciones evaluadas e inhibió de forma potente la replicación de Echovirus 9 en la línea celular empleada con un elevado IS (95,05).
Conclusiones: el extracto hidroalcohólico de S. fluitans posee actividad antiviral in vitro frente a Echovirus 9. Este es el primer informe de actividad antiviral de esta especie frente a enterovirus.

Liena de Regla Ponce Rey, Gloria del Carmen del Barrio Alonso, Iraida Spengler Salabarría, Sonia Resik Aguirre, Annele Roque Quintero
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Actividad antiviral de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A y B

Introducción: la terapia antiviral frente a las infecciones provocadas por virus influenza se basa en empleo de inhibidores de las proteínas M2 y neuraminidasa (NA). Sin embargo, la emergencia de cepas estacionales resistentes a ambos grupos de fármacos motiva la búsqueda de nuevos fármacos anti-influenza. Los extractos de algas pueden ser utilizados como fuente para la obtención de estos compuestos, teniendo en cuenta la diversidad de metabolitos descrita en estos organismos.
Objetivo: evaluar la actividad antiviral in vitro de un extracto acuoso del alga roja Laurencia obtusa frente a virus influenza A (H1N1), A (H3N2) e influenza B.
Métodos: se evaluó la citotoxicidad en células MDCK, mediante cálculo de la viabilidad celular, en presencia de concentraciones crecientes del extracto. Los efectos sobre la replicación viral se cuantificaron mediante determinación de los niveles de la hemaglutinina (HA) y de la inhibición del efecto citopático (ECP). El índice selectivo (IS) se calculó a partir de la relación IS=CC50/CE 50.
Resultados: el extracto acuoso de Laurencia obtusa posee actividad antiviral in vitro frente a virus influenza B, A (H3N2) y A (H1N1) con valores de IS de 7,73; 11,79 y 12,95; respectivamente.
Conclusiones: Laurencia obtusa inhibe la replicación de virus influenza de elevada importancia clínica. La realización de ensayos secundarios de caracterización de la actividad biológica, así como de caracterización molecular del extracto, podrían permitir el desarrollo de novedosos compuestos antivirales. Este trabajo constituye el primer informe de actividad inhibitoria de esta especie de macroalga frente a virus influenza.

Amilcar Pérez-Riverol, Alexander Piñón Ramos, Luis Francisco Morier Díaz, Yuneysi Torres López, Dianeya Mendoza Llanes, Gloria del Barrio Alonso
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